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2022一2023学年度高三一轮复周测卷（二十五）生物·基因工程，植物细胞工程获取更多免费资湖(考试时间40分钟，总分90分)非选择题：本题共6小题，共90分。带*题目为能力提升题，分值不计入总分。1.(15分)CBF1基因过量表达能提高拟南芥植株的抗寒性。苜蓿是饲草料产业发展的主要草种，低温等逆境胁迫会导致苜蓿减产。科研人员从拟南芥植株中克隆得到冷诱导转录因子基因(ACBF1),通过转基因技术培育抗寒紫花首蓿，以使苜蓿安全越冬，提高产量。回答下列问题：，障德因(1)在扩增AtCBF1基因的过程中，先根据量。具，设计引物，再进行PC℉扩增。扩增时，反应体系的初始温度设置在90~95℃的目的是酶。。PCR过程中需要使用(2)回收PCR产物并酶切后用将AtCBF1基因连接到Ti质粒上，以得到T-CBFI重组质粒。构建T-CBF1重组质粒时，同时使用BamHI和SacI进行双酶切的目的是(3)将目的基因导入受体细胞，培育后筛选转化阳性的植株。若采用分子杂交技术检测转基因紫花苜蓿植株目的基因的转录水，则需要将片段制成探针。(4)为进一步研究转基因紫花苜蓿的抗寒机制，请写出接下来还需要进行的操作：2.(I5分)小干扰RNA(siRNA)能诱导特定基因转录出的mRNA被降解，导致基因沉默。目前制备siRNA的方法中，最常见的是以质粒为载体，依赖一个启动子控制一段反向重复序列R转录，在细胞内生成短发夹RNA(shRNA),随后shRNA被特异性核酸酶剪切成siRNA(如图I),该载体被称为shRNA表达载体。研究人员对实验室常用的普通载体进行改造，构建了含有双启动子(U6)的shRNA表达载体(pdPRO),如图2所示，其中相关限制酶的识别序列及切割位点如表。回答下列问题：限制酶识别序列及切割位点Bgl llHindⅢBam HIBamHIGGATCC6REcoR I有U6EcoRIpdPRO R-GAATTCshRNABglⅡAGATCTsiRNAHindⅢAAGCTT(1)siRNA阻断了过程而关闭了相关基因，shRNA被特异性核酸酶剪切成sRNA的过程中，被破坏的化学键是d生物·周测卷（二十五）第1页（共4页）